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UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)發(fā)酵食品中微量乙醇的含量 

一、微量乙醇的介紹

微量乙醇是低度果酒，含酒*料和調(diào)味品等發(fā)酵食品中重要的風(fēng)味物質(zhì)。重鉻酸鹽氧化分光光度法測(cè)定微量乙醇含量，是一種快速準(zhǔn)確的測(cè)定方法，它具有操作簡(jiǎn)便，所需分析儀器簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，尤其適用于生產(chǎn)和質(zhì)檢部門(mén)的日常分析。 

二、UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)發(fā)酵食品中微量乙醇含量的測(cè)定原理 

在酸性溶液中，乙醇可被重鉻酸氧化生成乙酸，重鉻酸鉀中的六價(jià)鉻被還原成三價(jià)鉻，其反應(yīng)式為： 3C2H5O+2K2Cr2O7+8H2SO4=3CH3COOH+2K2SO4+2Cr2(SO4)+11H2O 反應(yīng)中生成的三價(jià)鉻為綠色，它在585nm處有zui大吸收峰，且溶液顏色的深淺與乙醇含量成正比，可以在分光光度計(jì)上比色，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行比較進(jìn)行定量。

三、UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)發(fā)酵食品中微量乙醇含量的儀器與試劑 

1、UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海奧析）

 2、蒸餾裝置 

3、PHS—3C酸度計(jì)（上海雷磁廠）

 4、乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確吸取2.00mlGR級(jí)無(wú)水乙醇，置于預(yù)先裝有少量蒸餾水的100ml容量瓶中，混勻，加水定容至刻度，搖勻備用。 

5、重鉻酸鉀溶液，稱(chēng)取10.00gAR級(jí)K2Cr2O7，用少量水溶解，并定容至250ml。 

 6、濃硫酸：AR級(jí)，含量95~98%。 

 7、1%溴百里酚藍(lán)指示劑 

8、  NaoH溶液：C(NaoH)=1.0mol/L  

四、UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)發(fā)酵食品中微量乙醇含量的操作方法 

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 

取7支25mlA級(jí)比色管，各加入2.00ml重鉻酸鉀溶液和2.50ml濃H2SO4，混勻，并冷卻，依次加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00和1.25ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，反應(yīng)10分鐘后加水至刻度，再次混勻，以0號(hào)管調(diào)零，于585nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

 表1

2、樣品的制備 

準(zhǔn)確移取100.00ml樣品于250ml蒸餾燒瓶中,加入25mH2O,再加數(shù)滴溴百里酚藍(lán)指示劑，用NaoH溶液滴定至藍(lán)色（深色樣品用酸度計(jì)指示中和至中性），加幾粒沸石，連接好蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾，餾出液用100ml容量瓶收集，接收瓶用冰浴進(jìn)行冷卻，緩慢蒸餾至接近刻度時(shí)取下，放入20℃水浴中30分鐘，用H2O定容至刻度，搖勻，備用。

3、樣品的測(cè)定 

取1.00ml制備好的樣品，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制的方法進(jìn)行測(cè)定，利用回歸方程計(jì)算出樣品中乙醇的含量。

 五、UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)法測(cè)發(fā)酵食品中微量乙醇含量的結(jié)果與討論 

1、波長(zhǎng)的選擇 

吸取1.25ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述測(cè)定方法進(jìn)行操作，并在UV1901PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上400~800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)樣液進(jìn)行掃描，掃描結(jié)果表明，該體系在585nm波長(zhǎng)隨近有zui大吸收峰，并且試劑空白值在該波長(zhǎng)處很低，故選擇λ=585nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。 

2、濃H2SO4用量對(duì)吸光度的影響 

按反應(yīng)式計(jì)算，確保2.00ml重鉻酸鉀溶液全部參加反應(yīng)，約需0.6ml98%的濃H2SO4，實(shí)際工作中，為確保反應(yīng)迅速、*，濃H2SO4用量常常過(guò)量。在固定重鉻酸鉀溶液用量和反應(yīng)時(shí)間的前提下，在一定范圍內(nèi)混合體系的吸光度隨濃H2SO4用量的增加而增加，當(dāng)濃H2SO4用量超過(guò)2.50ml時(shí)，吸光度趨于穩(wěn)定，故選擇濃H2SO4用量為2.50ml。 

3、顯色時(shí)間與穩(wěn)定時(shí)間  按照試驗(yàn)方法測(cè)定同一樣液在不同時(shí)間的吸光度值，結(jié)果表明，混合體系的吸光度在顯色10分鐘后至至少6小時(shí)以?xún)?nèi)基本保持穩(wěn)定。 

4、方法精密度 

測(cè)定次數(shù)  對(duì)麥精啤露樣品重復(fù)6次測(cè)定，變異系數(shù)為1.12% 

5、靈敏度與線(xiàn)性范圍 

該分析方法的檢出限為0.05%，乙醇含量在0~25ul/25ml范圍內(nèi)呈顯著的線(xiàn)性關(guān)系。  

6、樣品測(cè)定及回收率  

用本方法對(duì)監(jiān)督檢驗(yàn)抽取的含酒*料、醬油、低度山葡萄酒等多組樣品進(jìn)行測(cè)定，加標(biāo)回收率在96.0~100%之間，測(cè)定結(jié)果令人滿(mǎn)意